以HEK293细胞为模型，探讨了人类氨基肽酶n（hAPN）在猪三角洲冠状病毒（PDCoV）入侵人类细胞中的作用。RT-qPCR/Sri-Lanka在HEK293细胞中增殖，然后利用CRISPR／Cas9技术在敲除hAPN基因构建HEK293细胞系，通过CCK－8试验验证敲除细胞和野生型细胞的细胞活性。RT、qPCR和Western　blot检测到hapn基因敲除和过表达对PDCoV复制的影响。通过同源建模和分子对接，进一步预测了PDCoV、S蛋白和hAPN蛋白的结合位点。结果表明，PDCoV在感染HEK293细胞后12至36小时内迅速增殖，36小时达到高峰，并可在HEK293细胞中传播至至少两代。hapn基因敲除细胞与野生型细胞的活性无显著差异。hAPN基因敲除可显著抑制PDCoV的复制，hAPN基因的过度表达可促进PDCoV的复制。同源建模和分子对接表明，S1蛋白可以与hAPN蛋白结构域II结合，主要是S1蛋白的受体结合基序1。氨基酸残基TYR92、THR、51、THR48、PHE16和MET14通过氢键与氨基酸残基、PHE490、GLN531、ARG528和SER529在hAPN蛋白有约束力。HAPN在PDCoV的人类细胞感染中发挥着重要作用，这为深入研究PDCoV的细胞入侵和跨物种传播机制提供了新的理论基础。