基于CRISPR/Cas9系统建立SNX11基因敲除A549细胞系

作者:刘铁柱; 李阿茜; 李川; 梁米芳; 王世文
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为了建立SNX11基因稳定敲除A549细胞系,本研究构建了针对人类SNX11基因的特异性靶向慢病毒载体,在慢病毒感染A549细胞系和嘌呤霉素筛选慢病毒感染阳性的A549细胞,通过梯度稀释法和扩增培养获得单细胞细胞,提取细胞基因组DNA和PCR扩增,然后对其测序进行验证,同时,提取细胞蛋白后,用Western Blot法验证蛋白敲除,最后检测细胞活性并评估脱靶效果。最后,获得了一株SNX11基因敲除A549细胞系菌株。通过对漏检效果的评价,结果表明,在最有可能的20个漏检点没有漏检现象。基因敲除对细胞增殖活性无影响。本研究成功构建了SNX11基因敲除A549细胞系,为SNX11蛋白的功能研究建立了细胞模型。