LncRNA63及其共表达基因Hr3在家蚕中的表达和功能分析

作者:王博; 李苗苗; 王景娅; 胡晓玥; 阚云超; 乔惠丽
更新时间:

【目的】本研究旨在分析一种新的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及其共表达基因在蚕Bombyx mori中的表达和功能,以进一步阐明lncRNA调节家蚕发育的分子机制。【方法】根据家蚕早期脂肪体的转录组测序数据,我们发现,在蜕皮激素20E(2g/L)处理的5龄幼虫早期脂肪体中,lncRNA 63的表达显著上调,并且家蚕激素受体基因Hr3与之共表达。采用QRT-PCR技术对lncRNA63和Hr3号家蚕不同发育阶段(4-5龄幼虫、蛹和成虫)进行了检测,分析了5龄幼虫在不同组织(头部、体壁、血淋巴、中肠、马氏管、脂肪体、丝腺、睾丸和卵巢)和2g/L20E处理2、6、12和24小时后的表达谱。通过核质分离和免疫组化检测lncRNA 63在家蚕BmN细胞中的定位。qRT-和PCR检测了lncRNA63的表达,以及RNA干预lncRNA63对头部、丝腺、脂肪体和体壁中Hr3蛋白表达的影响。结果]QRTPCR结果显示,lncRNA63和Hr3在羽化前蛹末表达达到峰值。它们在5龄幼虫的头部、体壁和丝腺中高度表达。2G/L 20E处理2、6和12小时后,lncRNA 63和Hr3在5龄幼虫脂肪体中的表达显著高于对照组(阿蒙尼亚处理组),并在24小时降至与对照组相同的水平。lncRNA63和Hr3的表达趋势完全一致。LncRNA63主要位于BmN的细胞核内,但20E可诱导lncRNA63的核质迁移。用dsRNA干扰lncRNA 63的表达后,Hr3的表达显著下调。结论]20E不仅可以调节lncRNA 63的表达,还可以诱导lncRNA 63的核质迁移。lncRNA63通过调节共表达基因Hr3的表达,参与家蚕的变态和发育。