贝莱斯芽孢杆菌HN-1突变体文库的构建及Arp基因的鉴定

作者:王雨; 沈钰莹; 方渝凯; 缪卫国; 刘文波; 靳鹏飞
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贝莱斯 芽孢杆菌HN-1是一种生防芽孢杆菌菌株,对香蕉枯萎病的4号生理小种尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4)具有良好的抑制活性。本研究的目的是在生防菌HN-1建立突变文库,在突变文库的基础上深入研究芽孢杆菌生物防治的抑菌机理,为香蕉枯萎病生物防治奠定坚实的理论基础。携带转座子TnYLB-1的温度敏感质粒载体-pMarA质粒被化学转化为贝莱斯芽孢杆菌HN-1。经过50次高温诱导,构建了由1800个基因组成的贝莱斯-芽孢杆菌HN-1突变文库,质粒消除率为99.7%。用平板抑菌法筛选出一株对伊抑制活性降低的突变体。反向PCR技术用于确定插入基因与贝莱斯芽孢杆菌模型菌株fzb42抗砷蛋白(RBAM-550730)基因之间的同源性为99%,该基因与贝莱斯芽孢杆菌模型菌株fzb42在系统发育树中的基因属于同一分支。通过在HN-1突变体文库中筛选和鉴定抗菌活性缺失的突变体,发现HN-1的Arp基因与生防活性密切相关。