布氏锥虫自噬蛋白ATG12的表达、纯化及二级结构预测
作者:王瑞; 崔冲; 郑伟; 涂晓明
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[目的]表达纯化蛋白并预测其二级结构方法]克隆TbA的TG12编码序列,通过酶消化和连接构建表达载体TbATG12(pET-28a),转化BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白表达,并由Ni2+-NAT亲和层析和分子筛层析纯化蛋白。用核磁法收集二维谱图的一级和二级结构,用JPred4号预测二级结构结果]16和0.5 mmol/L IPTG诱导20小时后,TbAtg12以可溶性蛋白质的形式存在。纯化蛋白纯度可达95%。TbATG12谱峰分布均匀,实力雄厚。二级结构预计包含3个螺旋和5个折叠,这为后续分析TbATG12溶液的结构提供了指导。结论]可溶TbATG12蛋白的纯度在克隆、表达和纯化后超过95%。二级结构预测和比较表明,其结构在演化上非常保守。