肿瘤转移相关基因1短式在大肠杆菌中的表达
作者:刘洋; 王攀琦; 王芳; 刘星吟; 董兰; 魏瑶璐; 宁志丰; 沈定文
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目的构建肿瘤转移相关基因1短型(MTA1s)原核表达载体并诱导其蛋白表达,为后续的MTA1s相关研究奠定基础。方法从对数生长期上取乳腺癌MCF-7细胞,提取细胞总重量,反转录成cDNA,并以其为模板扩增MTA1s基因的蛋白编码区。通过一步克隆法将目标片段插入表达载体的pET-28a(+),并构建重组原核表达载体(命名为pET-28a-MTA1s)。构建的重组载体经双酶切、聚合酶链式反应(PCR)和测序鉴定。MTA1s重组蛋白的表达是由pET-28a-MTA1s导入细菌BL21的异丙基-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导的(DE3)。通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白(MTA1s)的表达,并在重组蛋白(MTA1s)鉴定蛋白免疫印迹分析(Western blot)的表达。结果从MCF-7乳腺癌细胞中扩增出大小和位置正确的片段。双酶切和PCR验证了构建的pET-28a-MTA1s重组载体是正确的,DNA测序证实了序列是正确的。考马斯亮蓝染色凝胶和Western blot人结果表明,IPTG诱导的重组蛋白分子量正确,条带单一。结论成功构建了pET-28a-MTA1s原核表达载体,为后续的下游实验研究奠定了基础。