Sanger测序，又称第一代测序技术，作为测序的金标准，促进了人类基因组工作框架图的绘制，但由于其通量低、成本高的缺点，限制了其进一步大规模应用。第二代测序技术，又称下一代测序技术，以其高通量、低成本等优点在基础研究和临床诊断治疗中得到了广泛应用。然而，短读和长读一直是其不可避免的技术弱点。第三代测序技术脉的出现，由于其长阅读优势，为分析基因序列中的复杂重复区域和高质量基因组组装提供了新的技术手段。近年来，第三代测序技术得到了进一步的发展和完善，并逐渐体现出其在肿瘤、免疫、生殖等相关领域的临床应用价值。本文就第三代测序技术的研究进展及临床应用作一综述。