利用CRISPR/Cas9技术定向编辑水稻nsLTPs家族基因OsLTPL166
作者:王伟; 王俊敏
更新时间:
非特异性脂质转移蛋白(ns-LTPs)广泛存在于植物界,参与许多关键的生物学过程,如花粉发育、种子发育和细胞壁延伸。Osltpl166全长465bp,由154个氨基酸组成。根据跨膜结构域和信号肽预测,Osltpl166在氨基酸13~35处包含一个跨膜结构域,N端有一个32个氨基酸残基信号肽,裂解位点位于氨基酸残基32和33之间,形成了一个成熟的蛋白质,其中有122个氨基酸残基。组织表达分析表明,Osltpl166仅在种子中特异表达,在种子发育后期表达更高。为了研究水稻Osltpl166在种子发育中的作用,本研究构建了一个敲除载体,并以“浙辐粳83”为遗传背景,利用CRISPR/Cas9技术编辑了Osltpl166。共获得24个独立的转基因系,其中7个为纯合突变。编辑方法主要是碱基插入和删除,导致氨基酸序列移码,成功获得了Osltpl166功能缺失突变体。本研究为进一步探索该基因在种子发育过程中的生物学功能提供了遗传材料。